熒光原位雜交技術(shù)原理及應用

原位雜交(in situ hybridization,ISH）指將目標DNA或RNA序列通過放射性或非放射性物標記后與染色體DNA進行雜交檢測目標序列在染色體上的位置與分布特征的技術(shù)。熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)指用熒光標記物代替放射性同位素標記探針而進行的原位雜交。本文概述熒光原位雜交技術(shù)原理、標記物的選擇、技術(shù)要點、發(fā)展及應用。

一、熒光原位雜交技術(shù)原理

熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)。其基本原理是如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經(jīng)變性—退火—復性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應，經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。與其他雜交技術(shù)進行綜合比較發(fā)現(xiàn)，熒光原位雜交技術(shù)（FISH）具有一些優(yōu)勢：循環(huán)周期短，穩(wěn)定性高，非常安全；分辨率高，為3～20 Mb；探針能較長時間保存；多色標記，簡單直觀；在熒光顯微鏡下在同一切片上同時觀察幾種DNA探針的定位，直接得到其相對序列和位置，從而大大加速生物基因組和功能基因組定位的研究。